微卫星不稳定性（MSI）检测方法及临床意义

大家好,今天小编来为大家解答以下的问题，关于微卫星不稳定性（MSI）检测方法及临床意义 ，这个很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！

MSI现象是Jacobs和其他人在1993年首次在结直肠癌中发现的。随着研究的继续加深，研究人员发现MSI现象发生在子宫内膜癌，胃癌，肝细胞癌和乳腺癌等实体瘤中。

MSI检测方法

目前，当检测癌细胞中的MSI时，可以通过检测MMR基因缺失（例如依赖于免疫组织化学技术的蛋白水平检测）来确定MSI发生，还是直接检测MSI的序列变化，例如通过聚合酶链反应（PCR）检测分子水平检测的序列变化。

免疫组织化学方法（IHC）

一种常见的方法是使用免疫组织化学检测肿瘤组织中不匹配修复基因MLH1，MSH2，MSH6和PMS2的表达。任何不匹配修复基因表达缺失均定义为MSI，否则是微卫星稳定性（MSS）。其中，一种表达缺失称为低度微卫星不稳定性（MSI-L），两个或多个蛋白质表达缺失是高度微卫星不稳定性（MSI-H）。

通过这种方法检测MSI相对简单，成本低。但是，也存在一些问题，例如使用抗体不一致和病理学家阅读标准不一致。

分子水平检测

聚合酶链反应（PCR）技术目前主要使用多种荧光PCR与毛细管电泳结合，以通过PCR技术检测特定的微卫星重复序列扩增来确定MSI状态，并比较肿瘤患者样品组织和正常组织中的位点突变。比较地点是国家癌症研究所（NCI）推荐的五个微卫星地点：BAT-25，BAT-26，D5S346，D2S123和D17S250。其中，在更改时，确定两个或多个站点是MSI-H，在更改时仅确定一个站点是MSI-L，并且没有确定位点是MSS。一些研究认为，二核苷酸重复的特异性和灵敏度低于单核苷酸重复序列的特异性和敏感性，因此对于哪些位点是MSI检测最合适的位点仍然存在争议。 Bacher等。评估了266个微卫星位点检测的敏感性和准确性（包括单核苷酸，二核苷酸，四核苷酸和固定核苷酸微磷灰石位点），并提出了Promega分析系统，该系统使用了5个使用5个单核苷酸微位材位点（BAT-25，BAT-25，BAT-26，NRIC和NRRIC和NRRIC，NRR-21，NRR-21，NRR-21，NRR-21，NRR-21，NRR-21，NRR-21，NRR-21，NRR-21，NRR-21，NRR-21，NRR-21，NRR-24）微卫星位点（penta c和penta d）检测MSI。

大量实验已经证实，MMR免疫组织化学的结果与MS中PCR的结果高度相关，灵敏度为92，特异性高达100。

该方法当前是检测MSI的“黄金标准”，但是操作过程是复杂且昂贵的。在结果的判断中，我们将面临以下问题，例如过度或太少的荧光，非特异性峰，微不足道的峰值大小变化以及杂合的丧失。

下一代测序方法（NGS），也称为第二代测序技术，是一种高通量测序技术，可以同时确定数十万至数百万至数百万基因分子的序列。目前，NGS方法已成为检测MSI的新工具，其最大优势是它可以实现多站点的高通量检测。纪念斯隆·凯特林癌症研究中心（MSK）的一项研究使用NGS测试了12,288例实体瘤患者，并用MSIPCR/MMR-IHC进行了验证。实验表明，NGS方法的灵敏度高于MSI-PCR方法。

MSI检测的临床意义

目前，关于MSI检测的临床意义有以下观点：

首先，MSI和Lynch综合征筛查。 Lynch综合征，也称为遗传非型物结节癌（HNPCC），是一种具有家庭趋势的常染色体显性疾病。它是由MMR基因中的种系突变引起的，约占所有结直肠癌的3至5。林奇综合征最突出的特征之一是，载体本人或他的家人可能患有大肠癌和其他各种与林奇综合症相关的肿瘤。 MSI是Lynch综合征的特征现象。超过90的林奇综合征表现出MSI，10至15的零星结直肠癌也具有MSI。

其次，MSI和大肠癌的预后。临床研究证实，MSI与大肠癌的预后密切相关。与MSS患者相比，MSI-H结直肠癌患者的生存优势显着，临床性能较差，但预后更好。研究已经证实，II/III期结直肠癌患者的MSI-H患者的总生存率和无病生存率显着延长。国家综合癌症网络（NCCN）发布了一份大肠癌指南，建议所有有大肠癌史的患者都应进行MSI测试。

第三，MSI和指南药物。研究已经证实，患有MSI-H的II期结肠癌患者无法受益于氟尿嘧啶（5-FU）治疗。同时，由于患有MSI-H晚期结直肠癌的患者通常具有诸如PD-1和PD-L1等分子的高表达，因此靶向PD-1/PD-L1的靶向抑制会促使人体的免疫系统攻击并杀死肿瘤细胞。目前，美国FDA已批准对PD-1免疫疗法单克隆抗体Pembrolizumab，ipilimumab和Nivolumab的最终治疗，用于转移性结直肠癌（MCRC），并具有不匹配修复缺陷。除了对MCRC的治疗外，2017年5月，美国FDA批准了PD-1抗体Pembrolizumab在成人和没有其他治疗选择，无法切除或转移性固体瘤的儿童中治疗DMMR/MSI-H表型的患者。

《结直肠癌诊疗规范》（2010年版）阐明了“ II期结直肠癌，有条件的人建议对MMR或MSI进行测试组织标本。如果DMMR或MSI-H，则不建议对氟尿嘧啶药物进行单药辅助化疗。”在《中国结直肠癌诊疗规范》（2017版）的组织病理学检查部分中，MMR或MSI检测是作为反复或转移性结直肠癌的推荐检测方法添加的。 “当确定为复发性或转移性结直肠癌时，建议检测K-RAS和N-RAS基因的表达，BRAF基因，不匹配修复蛋白表达或微卫星表达或微卫星状态以及肿瘤组织中其他相关基因状态以指导进一步治疗。”

相关测试产品简介

目前，有四种在国际上推出的产品：MSI-IVD Kit（Falco）

日本Falco公司的MSI-IVD套件已被日本卫生，劳动和福利部批准上市。该套件使用PCR技术来检测从癌组织中提取的基因组DNA中的MSI状态，并检测7个微卫星位点（5个单核苷酸微卫星位点BAT-25，BAT-26，NR-21，NR-21，NR-24，NR-24，Mono-27，Mono-27和2 Pentanuctide microsatellite Microsatellite Sites Pertes pentes Perta d）。该产品是一种伴随的诊断试剂，可指导在局部晚期或转移性癌症患者中使用PD-1抗体Pembr ol Izumab。

Ventana MMR IHC面板

该产品使用IHC方法检测四种MMR蛋白MLH1，MSH2，MSH6，PMS2和BRAF V600E突变蛋白在福尔马林固定的石蜡包含的结直肠癌组织中。它用于Lynch综合征的辅助诊断，BRAF V600E突变蛋白还用于零星结直肠癌和林奇综合征的辅助差异诊断。该产品可通过从头频道在美国获得。

MSK IMPACT TM

2017年11月，基于第二代测序技术的纪念癌症研究中心的癌症基因检测和分析平台MSK-Impact TM得到了美国FDA的批准。该产品可以同时检测468个患者肿瘤基因的突变，并可以检测MSI基因组特征。该产品仅限于MSK使用，其测试结果与任何药物没有结合。

Foundationone CDX（F1CDX）

2017年11月30日，美国FDA批准的基金会One CDX（F1CDX），这是一种用于多种实体瘤的体外检测产物的第二代测序，只能在基础医学上进行测试。除了检测324个肿瘤中324个基因突变外，该产品还可以检测两个基因组特征：MSI和肿瘤突变负担（TMB）。这是FDA批准的首个体外诊断测试产品，以获得癌症NGS的突破性识别。

随着研究的加深，MSI在肿瘤发生机制中的作用引起了越来越多的关注。尽管近年来，MSI检测越来越关注临床应用，但中国没有注册和批准的产品。 2018年，MSI检测套件已由州食品药品监督管理局（State Food and Drug Administration）制定了针对创新医疗设备的特别审查程序。该产品使用荧光PCR毛细血管电泳。